四虎成人精品无码永久在线丨亚洲色大成网站www永久网站丨人妻中文字幕无码专区丨激情综合色五月丁香六月欧美丨中文字字幕在线成人av电影

進口胎牛血清提取制備酶的經(jīng)典方法，多采用硫酸銨分級沉淀，胰酶在 75% 飽和度硫酸銨中沉淀，其它雜蛋白一般在 10% 硫酸銨飽和度下被沉淀而除去。經(jīng)此多次提取，后在 PH8.0peng 酸緩沖液中得到結(jié)晶。

本實驗擬通過從豬胰臟中制備胰酶結(jié)晶實驗，掌握酶的制備、一般分離、提取、純化和結(jié)晶的操作技術(shù)。同時為親和層析、免疫學實驗準備實驗樣品。

1、胰蛋白酶原的提取與分離：稱取 1－1.5 Kg 新鮮豬胰臟，在冰浴下剝除脂肪和結(jié)締組織，在低溫下用絞肉機絞碎胰臟 (或用高速組織勻漿機搗碎) 加 1－2 倍體積以預(yù)冷卻的 PH2.5 - 3.0 乙酸酸化水溶液提取 (按 1 g 組織相當于 1 ml 體積計算，以此類推)。檢查提取液中 PH，若高于 PH3.0 時應(yīng)及時用 10% 乙酸調(diào)節(jié)，使提取液維持 PH2.5－3.0 之間。在冷室 5℃ 左右攪拌提取 18－24 h，而后用 4 層紗布過濾，盡量擰擠出濾液，濾液呈乳白色，用約 300 mlpH2.5 乙酸酸化水再提取殘渣一次 (時間約為 1－2 h)，合并濾液，此時濾液 PH 值較高，可用 5M H2PO4 溶液調(diào)整 PH 至 2.5－3.0，放置 3－5 h 后，渾濁濾液冷卻后，用玻璃漏斗進行自然過濾，濾液呈黃色透明液體，收集濾液，量其總體積，棄去沉淀物。

2、鹽析：濾液加固體粉狀硫酸銨進行鹽析，使溶液至 75% 飽和度。鹽析溶液放冷室中過夜，次日用 4000r/min 離心機離心，或用布氏漏斗抽濾，濾餅經(jīng)壓干后稱重，可得約 20 g 胰蛋白酶原粗制品。

3、胰蛋白酶原得激活：將胰蛋白酶原粗制品用 10 倍體積得冷蒸餾水，分多次加入使濾餅溶解，溶液呈乳白色，量其體積，取出 1 ml 溶液用于測定，溶液中硫酸銨得含量 (約為濾餅重得 1 / 4)。因為硫酸銨可以與活化劑鈣離子結(jié)合，硫酸鈣，如果鈣離子過少會直接影響胰酶原的激活過程，按濃度量計算，將已研細的固體 CaCL2 慢慢加入酶原溶液中，邊加邊攪拌均勻。用 5MNaOH 溶液調(diào) PH 至 8.0。在酶溶液加入約 5 mg 結(jié)晶豬胰蛋白酶，輕輕攪拌均勻，置 5℃ 冰箱中使酶原活化。

4、純化：去除雜蛋白，量取胰蛋白酶溶液體積后，用 5M 硫酸溶液調(diào)節(jié)濾液 PH 至 2.5－3.0，抽濾除去硫酸鈣沉淀，濾液體積約 1000 ml，加入已經(jīng)研細的硫酸銨粉末，使其溶液達 40% 飽和度 (每升濾液加 242 g 硫酸銨)。放置 5℃ 冰箱中 5－8 h, 抽濾除去沉淀。

 希望以上文章能幫助大家了解目前研究進展及我們的核心技術(shù)，歡迎各位老師聯(lián)系我們咨詢、提出意見，愿我們的努力成果與您的科研碰撞出不一樣的火花！